细胞外基质来源的纤维环-髓核双相支架的研制及裸鼠体内异位构建组织工程椎间盘的实验研究

摘要

目的:以骨基质明胶(BMG)和脱细胞软骨基质(ACM)为材料,研制一体化纤维环-髓核支架,并观察其在裸鼠体内异位构建组织工程一体化椎间盘的可行性.rn 方法:以BMG和ACM为材料采用脱细胞结合冷冻干燥法制备一体化纤维环-髓核复合支架,并检测其理化性能及细胞相容性.纤维环细胞和髓核细胞分别标记PKH26荧光,接种入一体化支架不同相中,植入裸鼠背部,6w后利用分子小动物活体荧光成像系统评价组织工程化组织在裸鼠体内生长情况,取材进行荧光显微镜下观察、组织学染色.rn 结果:髓核相呈透明状，纤维环相呈乳白色，镜下Hoechst 33258染色未见细胞残留，天狼星红染色纤维环支架深红染，髓核支架呈黄绿色，两支架结合紧密，电镜观察支架具有良好的孔径及孔隙率。压缩弹性模量为49.06±115.57 kPa，与正常椎间盘的压缩弹性模量同一数量级。扫描电镜观察细胞粘附在双相支架上且周围有基质分泌，Dead/Live染色示细胞在双相支架上活性良好;6w后，活体荧光成像显示椎间盘细胞在支架内生长良好，从髓核往纤维环荧光强度减弱，细胞支架复合体在在裸鼠体内形成椎间盘样组织，HE、番红O染色、甲苯胺蓝染色阳性。rn 结论:天然骨基质明胶和软骨基质来源的一体化纤维环-髓核支架复合椎间盘细胞能够在裸鼠皮下异位构建椎间盘样组织。