欧石楠体细胞胚发生过程中的甲基化研究

摘要

利用甲基化敏感扩增多态性(MSAP)方法,对欧石楠大田苗、胚性愈伤组织和再生苗的DNA甲基化进行了研究.本试验从64对选扩增引物中筛选出19对,共扩增得到506条带,统计显示,大田苗、胚性愈伤组织和再生苗的全基因组DNA甲基化水平分别为31.42％、27.86％和29.05％,三种试材之间发生甲基化变异的有175条带,变异率为34.58％.对比发现,体胚诱导形成胚性愈伤组织过程中,甲基化水平降低,而在再生苗中有所恢复,与大田苗接近.在外侧胞嘧啶甲基化水平上,胚性愈伤组织的甲基化水平有所增加,且在再生苗中可部分维持.分析3种试材之间175条变异带的DNA甲基化变异带型发现,再生苗中恢复到大田苗DNA甲基化模式的有62条变异带,占总变异条带的35.43％,而与胚性愈伤组织维持相同DNA甲基化模式的有59条变异带,占33.71％;通过对部分甲基化变异条带的回收,最终得到8条有效的基因组DNA序列,BLASTn比对分析表明,欧石楠基因组中包括抗性基因、蛋白激酶、质体基因等在内的多种类型的DNA序列中均存在DNA甲基化修饰现象.