Rad基因重组腺病毒在培养乳鼠心肌细胞中的表达

摘要

目的：研究外源性Rad基因重组腺病毒在体外转染乳鼠心肌细胞后的转染效率及Rad基因的表达情况.方法：构建Rad腺病毒载体,以不同的MOI值转染体外培养的原代乳鼠心肌细胞,通过荧光显微镜观察转染后荧光强度及转染效果,流式细胞仪检测转染率,采用RT-PCR、Western blot检测Rad基因表达情况.结果：心肌细胞转染48h 后,光镜下显示正常心肌细胞,细胞伸出伪足交织成网,呈同步性收缩.荧光显微镜下心肌细胞发出绿色荧光,荧光强度较强.在MOI值5时,转染率仅为29.84％,MOI值10时,转染率为69.69％,MOI值15时,转染率为77.20％,MOI值20时，转染率高达84.81％，心肌细胞未见明显抑制,MOI值30时，转染率为78.82％，心肌细胞出现抑制.MOI值为20时，转染率在80％左右,MOI值高于30时,心肌细胞开始出现抑制，在MOI值为20,体外转染Ad-Rad的心肌细胞Rad基因mRNA和蛋白表达显著增加.腺病毒转染24h后,Rad mRNA表达较对照组开始升高,第三天表达最高,第4,5天表达降低。Ad-Rad转染三天后检测Rad 蛋白表达,Ad-Rad组较Ad-GFP和空白对照组蛋白表达明显升高,差异有统计学意义。结论：MOI值对腺病毒转染率有明显影响，外源性Rad基因可以在乳鼠心肌细胞中稳定表达。