鸭瘟病毒UL46基因主要抗原域的克隆、原核表达及其产物的抗原性分析

摘要

采用软件DNAStar Protean程序，综合运用二级结构、亲水性、可塑性和抗原性指数等参数，对本实验室新鉴定的鸭瘟病毒(Duckplague virus，DPV)UL46基因(GenBank登录号EU195108)及其编码多肽的主要抗原域进行分析。结果显示DPV UL46基因全长2220 bp，编码739aa，其多肽链的柔性区域所占比例最大(52.77%)，具有较好的亲水性、可塑性和较高的抗原指数。UL46基因的主要抗原域分布于整个多肽链，但主要位于氨基端第Ser423-Thr449、Val451-Ser500、Phe502-Tyr526、Asn540-Thr596、Glu614-Ala651、Ser655-Ser671、Gly681-Cys700区域内。以DPV CHv毒株基因组为模板，利用Primer Premier5.0软件设计一对特异性引物，扩增涵盖上述主要抗原域的基因片段(700-2220 bp)，将其亚克隆到原核表达载体pET-32a中，获得重组质粒 pET-32a/UL46M，再将其转化至E.coli Rosetta(DE3)。经IPTG诱导表达，SDS-PAGE结果表明相对分子量约为79 kD的融合蛋白以包涵体形式表达。以兔抗DPV多克隆血清进行Western blot，显示可与该融合蛋白发生特异性反应。结果为进一步开展UL46基因功能的研究提供了重要数据和关键研究材料。