B亚型禽偏肺病毒核酸探针的制备与应用

摘要

目的：为探明山东省禽偏肺病毒(aMPV)的流行情况，制备B亚型禽偏肺病毒棱酸探针对我省部分地区的商品肉鸡进行病原检测。 方法：根据GenBank中已经发表的B亚型禽偏肺病毒基因的保守序列，设计合成一对引物，利用RT-PCR扩增出一条与目的片段大小一致的基因片段(725bp)，回收并纯化此PCR产物，制备出地高辛标记的aMPV核酸探针。 结果：特异性检测结果表明，该探针能与B亚型aMPV棱酸发生特异性杂交，而与对照的H9N2亚型AIV、NDV、IBV、ORT和E.coil的核酸杂交反应为阴性；敏感性检测结果表明，该探针对B亚型aMPV的最低检出量为3pg。应用该探针对山东省不同地区的142份具有呼吸道症状的和55份临床健康的商品肉鸡进行了核酸探针检测，阳性检出率分别为57.04%和60.0%。 结论：本研究所标记的B亚型aMPV的地高辛探针特异性强敏感性高，用于B亚型aMPV的检测是可行的。对样品的检测结果表明B亚型aMPV感染在山东省部分地区的商品肉鸡群中是普遍存在的。