猪肺炎支原体黏附因子P97R1、膜蛋白P46单抗制备

摘要

目的：P46蛋白是猪肺炎支原体的主要免疫优势蛋白，且与其它支原体无交叉反应，常作为猪肺炎支原体检测的靶蛋白或靶基因。P97蛋白是猪肺炎支原体的黏附因子，与病原的感染与致病机制相关，其中R1区是P97蛋白的主要抗原决定簇。制备针对该两种蛋白的特异性单抗能为猪肺炎支原体的检测及机理研究提供有效的资源。 方法：本研究用猪肺炎支原体全菌抗原免疫小鼠，分别利用大肠杆菌表达的P46蛋白和P97R1蛋白作为筛选抗原制备P46与P97R1的单克隆抗体。 结果：本研究成功制备了两株针对P46的特异性单克隆抗体1A4和3c11以及三株针对P97R1的特异性单克隆抗体2A10，6C4和6C5。两株P46单抗最高EusA效价可达1:64000，且均能与原核表达的P46蛋白及猪肺炎支原体全菌蛋白中46KD大小的蛋白发生特异性反应.但配对试验表明，该两株P46单抗是针对同一表位的单抗。三株P97R1单抗中，2A10与6C5两株滴度较高，ELISA效价达1:32000.配对试验表明该三株单抗分别针对P97R1蛋白的不同表位。Western-blot结果表明，三株P97R1单抗均能与原核表达的P97R1蛋白及猪肺炎支原体全菌蛋白中80-120KD之间的两蛋白发生特异性反应。本研究制备的五株杂交瘤细胞株经三个月冻存或连续传代三个月均能保持较高的滴度。 结论：本研究分别成功制备了两株针对猪肺炎支原体P46蛋白以及三株针对P97R1蛋白的特异、稳定且高滴度的单克隆抗体。