TaqMan实时荧光PCR快速检测赤羽病病毒

摘要

赤羽病(也称阿卡班病)是由阿卡班病毒(Akabane virus，AKV)引起牛、羊等动物流产、死产、死胎、胎儿畸形、以及先天性关节弯曲-积水性无脑综合征(简称AH综合征)的一种虫媒传染病。我国许多省也流行本病，该病的大规模爆发给畜牧业带来巨大经济损失。本研究根据GenBank登录的赤羽病核蛋白基因S RNA核苷酸序列设计引物和Traqman荧光探针，建立了用于检测赤羽病病毒的实时荧光定量PCR方法。在本研究中，对实时荧光定量PCR反应条件进行了优化，评估了该方法的特异性、灵敏度和重复性，并建立了绝对定量方法。特异性试验证实，该方法只能检测到赤羽病病毒，与EHD、BTV、VSV等多种常见的动物病毒没有交叉反应，具有高度的特异性。所制作的标准曲线表明，在5.8×10(7)～5.8×10(1)拷贝数之间有很好的线性关系(r=0.994)，最少可检测到58个拷贝的阳性质粒，敏感度很高。同一样品于试验内及试验间的重复性试验发现，变异系数分别为3.19％和4.23％，重复性极好。本方法的检测时间从核酸抽提到出具结果仅需3个小时。试验结果表明，本研究所建立的赤羽病病毒实时荧光PCR检测方法具有特异性好、灵敏度高、检测耗时短的特点，并且能对病毒进行准确的定量分析，不仅适合疫情监测、口岸进出口检验检疫的需求，而且可以作为研究该病毒感染过程的有力工具，其具有良好的应用前景。