布鲁氏菌wecA基因缺失株构建及其毒力、免疫效力评价

摘要

为了研究开发新型布鲁氏菌安全、具有诊断标记的基因缺失疫苗，本文利用非标记的基因同源重组技术对羊布鲁氏菌wecA基因进行删除，获得羊布鲁氏菌缺失菌株BDwecA。通过吖啶黄凝集试验和结晶紫染色试验鉴定该基因缺失菌株BDwecA为粗糙型菌株;进一步小鼠体内毒力试验发现相对于母本菌株16M，BDwecA在小鼠体内的存活时间明显缩短、毒力较低;而与现行疫苗株M5相比，则在小鼠接种后4-8周内增殖能力稍强，第8周后则明显低于M5，第16周则降低到检测限以下，但BDwecA接种小鼠不同时间的血清样品检测结果显示，该突变菌株不产生针对LPS的抗体，能够与自然野生型菌株感染进行鉴别。进一步小鼠体内免疫保护试验表明BDwecA在第12周、16周和20周三次攻毒试验中的免疫保护作用明显低于现有疫苗M5。从本研究结果可以看出，羊布鲁氏菌缺失菌株BDwecA毒力下降，具有粗糙型表型，在小鼠体内的免疫保护力较差，需要进一步通过本动物评价其作为疫苗候选菌株的可能性。