检测蓝舌病病毒双抗夹心ELISA方法的建立及应用

摘要

将纯化的蓝舌病病毒(Bluetongue virus，BTV)与弗氏佐剂乳化后，免疫6周龄BALB/c小鼠。分离免疫鼠脾细胞与SP2/0细胞融合，经BTV-ELISA、BTV VP7-ELISA和BHK-ELISA筛选，得到了3株可以稳定分泌抗BTVVP7特异性单抗的杂交瘤细胞株(1F5、4E5和6A1)。用纯化的BTV免疫家兔，按常规方法制备BTV多抗。选用抗VP7单抗(IF5)包被ELISA板，用兔抗BTV多抗作为捕获抗体，建立了检测BTV双抗夹心ELISA方法。用ELISA分别检测BTV、鹿流行性出血病病毒、水泡性口炎病毒、赤羽病病毒、小反刍兽疫病毒阳性样品，用RT-PCR作对照，结果表明ELISA具有良好的特异性。用ELISA和RT-PCR同时检测259份临床样品，结果表明ELISA的特异性和敏感性分别为99.1％和85.7％，两种方法的符合率为97.7％。