鲨肝刺激物质类似物cDNA片段的克隆及序列分析

摘要

目的：从鲨鱼肝脏中分离纯化肝刺激物质，测定N-端氢基酸残基序列，根据序列分析结果，合成简并引物，获得鲨鱼肝刺激物质的cDNA序列，并对其进行序列分析，比较其与已报道序列的同源性。 结果：通过离子交换和凝胶过滤层析方法，从鲨鱼再生肝组织中分离到一种可刺激肝癌细胞株SMMC-7721增殖活性的多肽，命名为鲨鱼肝刺激物质sHSS。进一步通过FPLC Mono Q柱纯化后，纯度可达95％以上，其得率为40mg/kg肝脏，SDS-PAGE分析表明：sHSS的分子量约为16000Da。对sHSS的氨基酸组分及N-端氨基酸序列进行了分析，并根据其N-端氯基酸残基序列设计了一套简并引物，利用RT-PCR方法从再生肝组织的总RNA中扩增到一大小为504bp的cDNA片段，序列分析表明其与己报道的肝再生增强园子ALR差异较大，而与人、鼠以及果蝇中的一种未知功能的蛋白质在氨基敌水平上的同源性较高，分别为84％，83％和57％，这类物质可能在生物机体中发挥重要的生理功能。 结论：通过RT-PcR扩增，获得了鲨肝刺激物质类似物的cDNA片段。