海洋双RNA病毒(MABV)VP2和VP3基因在昆虫细胞中的高效表达

摘要

利用RT-PCR技术，得到了海洋双RNA病毒MABVY-6株系A片段的cDNA，测定了序列。并进而克隆了病毒的外壳蛋白、VP2的抗原决定簇区642bp片段VP2e和另一结构蛋白VP3基因全序列，通过转座作用构建了重组杆状病毒表达载体，进一步转染粉纹夜蛾细胞。SDS-PAGE检测和薄层扫描表明，VP2e和VP3与增强型绿色荧光蛋白EGFP融合基因在昆虫细胞中得到了高效表达，融合蛋白表达量分别占整个昆虫细胞表达量的15.8％和8.2％。用VP2抗体对表达的VP2e融合蛋白进行Western blot-ting检测，结果表明表达产物具有很好的抗原性。用His Tag单抗对表达的、VP3融合蛋白进行的Westcmblotting检测，证明融合蛋白表达正确。该试验为进一步研究病毒结构蛋白和以昆虫作为生物反应器来生产病毒疫苗提供了基础。