牛分枝杆菌MPB83基因的原核表达及免疫活性分析

摘要

利用PCR技术从牛型分枝杆菌(M. bovis) Vallee菌株的全基因组DNA模板中扩增出了600bp的MPB83全基因片段,将PCR产物克隆至pMD18-T载体中,经核苷酸序列测定进行确证后,KpnI Ⅰ/EcoR Ⅰ双酶切后亚克隆到原核表达载体pET30a的相同酶切位点,构建成表达质粒pET-MPB83,将鉴定的重组质粒转化大肠杆菌BL (DE3)中,IPTG诱导后SDS-PAGE检测表达情况,重组质粒pET-MPB83在30Ku处有一特异表达带,与预计大小相符。经Ni柱纯化后,Western-blot检测纯化蛋白具有免疫活性,用纯化的该蛋白进行动物(兔)接种制备抗血清,用Western-blot和ELISA检测该抗血清的效价和特异性。总之,获得了该基因的克隆;蛋白表达,相对分子量为30Ku;用Ni获得了大量纯化的蛋白,经检测接种动物后制备的抗血清有较好特异性。