细菌对氯霉素类药物耐药基因的三重PCR检测试剂盒的研究与应用

摘要

氯霉素类药物包括氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考。虽然氯霉素和甲砜霉素已经陆续被各个国家禁止在临床上使用,但氟苯尼考所具有的抗菌作用强、毒副作用小等特点。使得该药的得到广泛的使用,因此此类药物的耐药性被受关注.本研究根据Genbank上发布的细菌氯霉素类耐药基因Cat1、FloR、CmlA的序列设计了三对引物,确定了反应体系中最佳的引物浓度、MgCl2浓度以及dNTP浓度,优化了三重PCR的反应条件,筛选出了阳性对照.使用本试剂盒检测同一批样品三次结果一致,显示出较高的重复性；能检测出耐药基因的细菌的最低浓度为6.0×102个拷贝/25μl；最佳保存条件是酶与反应体系分开装配,于-20°C冷冻保存,至少可以保存半年.应用该试剂盒检测猪源大肠杆菌57株,8个鸡场分离的鸡源大肠杆菌50株,Cat1、FloR、CmlA三种基因的检出率分别是41.1％、51.4％和36.4％,与药敏试验结果基本符合.本试剂盒对氯霉素类耐药基因的传播、流行调查以及在临床用药方面具有重要的指导意义。