J亚群禽白血病病毒超感染抗性鸡胚成纤维细胞系建立

摘要

将J亚群禽白血病病毒囊膜基因(ALV-Jenv)插入pcDNA3.1真核表达载体构建成转移载体pcDNA-env,并转染鸡胚成纤维细胞系DF-1,通过Zeocin药物筛选获得转染阳性细胞.细胞经传30代后,冻存.13个月后复苏,置不含药物的培养基中传代培养.连续传40代后,分别用PCR、Southern-blot、间接免疫荧光(IFA)及Western-blot对该细胞中的env基因进行了检测,并进行了抗病毒感染分析.研究结果表明,通过Zeocin药物筛选获得了稳定表达ALV-Jenv基因的鸡胚成纤维细胞系,命名为pcDNA-env-DF1细胞.该细胞在体外抗ALV-J感染试验中,能抵抗1×104个TCID50病毒感染量,提示所构建的细胞系具有良好的抗病毒作用.这一细胞系的构建为研究ALV-JEnv蛋白与宿主细胞表面受体相互作用分子机理提供了很好的工具,对进一步探索env基因功能,疫苗的开发及转基因抗病鸡的构建等具有重要意义.