CCL2/CCR2轴在肿瘤神经侵袭中的作用研究

摘要

目的:探讨CCL2/CCR2轴对肿瘤细胞神经侵袭的影响以及其作用机制。rn 方法:首先应用趋化因子芯片筛选小鼠背根神经节(DRG)神经生长模型的培养液，发现CCL2呈现高表达;检测多种类型肿瘤细胞系中CCL2受体CCR2的表达状态，多种肿瘤细胞系呈现高标达。体外研究，观察不同浓度的CCL2对人前列腺癌细胞系PC-3等肿瘤细胞迁移侵袭能力的影响以及下游蛋白的表达;应用shRNA技术，建立CCR2基因敲除的PC-3细胞株;观察不同浓度CCL2对shControl和shCCR2 PC-3细胞的迁移影响;建立体外肿瘤细胞神经侵袭的DRG模型，动态观察shControl和shCCR2 PC-3细胞的神经侵袭情况;建立CCL2野生型和CCL2基因敲除小鼠DRG神经侵袭模型，观察PC-3肿瘤细胞神经侵袭情况。体内研究，选用shControl和shCCR2 PC-3细胞株建立裸鼠坐骨神经移植瘤体内神经侵袭模型;对肿瘤细胞神经侵袭能力进行坐骨神经功能的监测和评估;MRI成像从影像学观察肿瘤与神经的关系;病理切片及免疫组化染色观察组织学的变化。rn 结果:研究表明，DRG神经生长模型分泌CCL2，外源性CCL2增强多种CCR2阳性肿瘤细胞的迁移能力。DRG分泌的CCL2通过活化p-MEK/MEK和p-AKT/AKT途径，进一步激活受体CCR2增强肿瘤细胞的神经侵袭。体外神经侵袭模型证明，阻断外源性CCL2和基因敲除CCR2均可降低PC-3细胞的神经侵袭能力。体内实验证实，基因敲除CCR2后可降低肿瘤的神经侵袭能力，保留神经功能。rn 结论:通过本研究，首次证明CCL2可促进肿瘤细胞的神经侵袭，CCR2的表达和肿瘤神经侵袭的发生密切相关。本研究为肿瘤神经侵袭的机制提供了一种新的分子模型，为CCL2/CCR2信号途径作为靶向的治疗方法在神经侵袭中的临床应用提供理论依据。