缺血-再灌注心肌缝隙连接蛋白43变构致缝隙连接通道关闭

摘要

目的:观测缺血-再灌注损伤对心肌细胞缝隙连接蛋白43 (CX43)结构与通道功能的影响,并观测CX43通道关闭与心律失常发生率的关系.rn 方法:采用大鼠离体心脏缺血-再灌注模型.硫磺素S荧光法区分心肌组织切片的梗死区、边界区与正常区,并确定缝隙连接蛋白CX43、zonula occludens-1(ZO-1)与钙粘着蛋白(N-cadherin)分布的改变.分离具有缝隙连接的心肌细胞,观测在缺氧条件下,CX43通道对荧光分子通透性的变化.rn 结果:硫磺素S荧光法可有效鉴别缺血一在灌注心肌组织切片的分区，在此基础上，发现荧光标记CX43的分布亦可区分心肌的梗死区、边界区与正常区。缺血-再灌注导致梗死区心肌细胞CX43与磷酸化CX43表达明显降低，ZO-1与钙粘着蛋白表达亦降低。蛋白印迹却显示，梗死区、边界区与正常区心肌CX43表达未改变。这些提示缺血一再灌注引起梗死区心肌CX43蛋白分子发生构象改变。在分离的单心肌细胞，缺氧30min使CX43表达明显降低。在缺氧条件下，荧光分子碘化乙咤通过心肌细胞缝隙连接CX43通道的速度明显降低，通过时间显著延长。在大鼠离体灌流心脏，CX43通道关闭剂辛醇显著降低缺血一再灌注诱发的心律失常。rn 结论:缺血一再灌注可导致心肌CX43蛋白分子发生构象改变，使CX43通道关闭，降低心律失常的发生率，发挥自我保护作用。