柔嫩艾美耳球虫棒状体颈部蛋白2单抗的制备与鉴定

摘要

为了进一步研究柔嫩艾美耳球虫棒状体分泌的蛋白在入侵宿主细胞过程中发挥的功能,在前期已 获得柔嫩艾美耳球虫棒状体颈部蛋白2(EtRON2)基因序列的基础上,根据氨基酸序列分析,对抗原位点较多的基因片段克隆,连接至原核表达载体pGEX-4T-2,构建了重组质粒,转化大肠杆菌BL21后诱导表达,获得重组蛋白rEtRON2.将重组蛋白rEtRON2免疫BALB/c小鼠,4次免疫后取脾脏制备免疫脾细胞,与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合,经ELISA和Western blot筛选得到稳定分泌EtRON2单克隆抗体的杂交瘤细胞株6B7D9,经检测分泌的抗体为IgG1亚类.《小鼠腹水及纯化的IgG效价分别为1-5.12×105、1-2.56×-106;间接免疫荧光定位试验显示该蛋白主要分布于子孢子棒状体的颈部；体外入侵抑制试验显示400Ug/mL IgG的入侵抑制率达到32.9％.研究结果表明成功制备了EtRON2单克隆抗体,为进一步研究子孢子入侵宿主细胞奠定了基础.