柔嫩艾美耳球虫乳酸脱氢酶生化特性研究及先导化合物筛选

摘要

本研究以柔嫩艾美尔球虫乳酸脱氢酶(LDH)的为研究,运用分子生物学技术成功克隆了EtLDH的ORF序列(966 bp).构建了EtLDH-pcoldI重组质粒,获得重组表达蛋白(53 kDa).重组表达的LDH在NADH的参与下,能够催化丙酮酸脱氢反应.对NADH和丙酮酸的Km分别为66±0.19μM和0.26±0.08μM.对NADH的Vmax=33.72±0.78umol/min/mg,对丙酮酸的Vmax=12.32±1.21mmol/min/mg.此外以LDH为靶标,大规模筛选商业化化合物库,获得3种能够有效抑制LDH的先导化合物:一种商品化的抗真菌药物依曲康唑能够明显抑制EtLDH活性,IC50为22.31±0.73μM;其次,苯琥胺的IC50值为55.73±1.33μM;此外发现棉酚能够在较低浓度下明显抑制EtLDH活性,其IC50为5.0175±0.3814μM,且随着棉酚浓度的增加,LDH对丙酮酸的Km and Vmax同时在降低,但Vmax/Km比值保持在0.5左右,显示棉酚是通过反竞争性抑制方式抑制了LDH的活性,本研究结果为研制新型抗球虫药物提供了理论和实验基础.