鸭源鸡杆菌毒素蛋白GtxA表达与间接ELISA方法的建立

摘要

鸡杆菌能够引起母鸡上呼吸道及下生殖道的感染,广泛分布于鸡体内.鸭源鸡杆菌是该属的代表种.扩增鸡杆菌毒力基因gtxa全长序列,并对GtxA蛋白的抗原性进行预测.将gtxa基因的部分抗原表位区序列克隆至pGEX-6P-1载体上,在大肠杆菌BL21(DE3)细胞内表达.重组菌在37℃条件下经IPTG诱导获得高效表达,SDS-PAGE结果表明该表达蛋白约为50KDa,以可溶性和包涵体两种形式存在.Westemn blotting分析表明,获得的蛋白具有良好的反应原性和特异性.以纯化的GtxA蛋白作为包被抗原建立了鸡杆菌抗GtxA间接ELISA检测方法.通过条件优化获得如下最佳反应条件:抗原包被量为0.403μg/孔,一抗血清稀释度为1∶160,二抗工作浓度为1∶2000,阳性判定标准为血清OD450≥0.28.应用建立的检测方法对临床上680份鸡血清进行检测,结果显示河南省不同地区感染阳性率为19.06％.这表明建立的间接ELISA方法为有效的鸡杆菌血清学检测方法,可应用于临床实际生产监测和流行病学调查.