猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白胞外区的串联表达及免疫原性分析

摘要

为建立基于GP5蛋白的PRRSV中和抗体检测方法,本实验通过基因合成技术将GP5蛋白的胞外区(GP5-ecto)进行串联合成,并将该串联基因克隆到pET28a载体上,在37℃培养含重组质粒pET28a-GP5-ecto的 E.coli BL21(DE3)细胞至OD600值为0.6-1.0时,以终浓度为0.5mM的IPTG诱导4小时后,重组GP5-ecto蛋白实现了高效表达.Western blot表明GP5-ecto蛋白能与PRRSV阳性猪血清发生特异性反应.Ni-NTA亲和层析纯化后,间接ELISA证实1∶400倍稀释的PRRSV阳性猪血清可检测到低达0.125μg/ml的GP5-ecto蛋白,表明GP5-ecto蛋白具有良好免疫原性.IFA试验证实GP5-ecto蛋白免疫BALB/c小鼠后获得的阳性鼠血清能与天然PRRSV病毒发生特异性反应,进一步说明GP5-ecto蛋白具有良好免疫原性.本研究获得的GP5-ecto蛋白为建立检测PRRSV中和抗体的ELISA方法提供了材料.