实验动物四种病原体多重PCR方法的建立与应用

摘要

目的：建立快速检测多杀巴氏杆菌、支气管鲍特杆菌、支原体和肺炎克雷伯杆菌4种实验动物病原体的多重PCR方法. 方法：根据Genebank基因设计出特异性引物;经过多重PCR的优化,特异性和敏感性的检测,建立多重PCR体系.应用该PCR体系检测人工感染样本和实验动物的气管分泌物,并与传统方法做对比. 结果：多重PCR扩增出多杀巴氏杆菌(356bp)、支气管鲍特杆菌(237bp)、支原体(266bp)和肺炎克雷伯杆菌(142bp)的目的条带.肺炎克雷伯杆菌敏感性为10pg,多杀巴氏杆菌、支气管鲍特杆菌、支原体敏感性为1pg,特异性检测未从其他病原菌中检测出目的条带.应用建立的多重PCR体系检测人T感染样本的不同组合,45只实验动物气管检测出15只多杀巴氏杆菌阳性,9只肺支原体阳性,但传统培养方法和血清学方法未检测出阳性标本. 结论：本文建立的多重PCR方法操作简单、快速、特异性强、灵敏度高,能够实现对多杀巴氏杆菌、支气管鲍特杆菌、支原体和肺炎克雷伯杆菌4种实验动物病原体的快速检测.