虎眼万年青鲨烯合酶基因克隆和功能鉴定

摘要

目的：药用植物虎眼万年青(Ornithogalum caudatum)中鲨烯合酶(Squalene synthase,SQS)是甾体皂苷生物合成中第一步关键酶,催化两分子法尼基焦磷酸(FPP)形成鲨烯(Squalene).拟通过转录组测序对虎眼万年青SQS基因发掘,合成cDNA,原核表达和功能鉴定; 方法：从RNA-Taq数据库中得到两个与SQS基因高度同源的unigenes.通过巣式PCR从O.caudatum中得到了开放阅读框1230bp编码409aa的OcSQS1全长序列.为得到其可溶性表达,采用了三种策略：诱导条件进行优化,构建不同类型带有融合标签、分泌肽、分子伴侣的表达载体以及对OcSQS1的截短突变. 结果：通过OcSQS1的截短突变得到了能够进行可溶性表达的蛋白,并具有催化两分子FPP转化形成鲨烯体外催化功能. 结论：首次通过实验验证了二次跨膜结构域对OcSQS1的正确折叠起到重要作用,为真核基因异源表达提供依据.