H5N1亚型禽流感病毒HA茎部10/11糖基化位点对病毒生物学特性的影晌

摘要

H5亚型流感病毒HA上糖基化位点根据其位置不同起着不同的作用.其中HA蛋白茎部的糖基化位点相对保守,在维持HA蛋白三聚体的稳定性发挥主要作用.本实验室前期研究表明:茎部第10/11位重叠糖基化位点可能对HA蛋白裂解产生影响,但不能确定哪一位点起着关键作用.本试验时H5N1亚型禽流感病毒(AIV)SY株为母本,通过定点突变和反向遗传技术构建了3种HA蛋白茎部糖基化位点缺失的重组病毒(rSY-△10、rSY-△11、rSY-△10/11),并对其生物学特性和致病性进行了测定.结果表明:SY株H5N1茎部第10位和第11位都可以形成糖基化位点.相较于野生型病毒来说,这三种重组病毒都表现出对热及低pH的不稳定性.但是在病毒传代过程中,rSY-△11和rSY-△10/11极易发生回复现象.rSY-△11和rSY-△10/11在CEF细胞上的增殖速率显著低于rSY-△10和野生型病毒(rSY).同时,Western blot检测发现rSY-△11和rSY-△10/11的HAO蛋白裂解时间较rSY-△10和rSY有明显的延迟.小鼠致病性试验显示,rSY-△11和rSY-△10/11的毒力显著低于rSY-△10和rSY.因此,H5N1亚型AIV SY株茎部第11位糖基化位点对于病毒HA蛋白裂解至关重要并可影响其毒力.