CPA恒温扩增技术检测炭疽芽胞杆菌方法的建立

摘要

目的：建立一种简便的新型交叉引物恒温核酸扩增结合层析试纸条方法,快速可视化检测炭疽芽胞杆菌核酸. 方法：通过序列比对挑选出炭疽芽胞杆菌质粒上的特异性基因pXO2,设计引物、探针并合成标记,建立核酸恒温扩增反应体系,用金标免疫层析试纸条快速检测扩增产物,并测试方法的灵敏度和特异性. 结果：建立的核酸恒温扩增结合金标条方法检测炭疽芽胞杆菌,采用阳性质粒DNA优化实验条件,灵敏度可达5.4pg/反应体系;建立的检测方法检测炭疽Sterne疫苗株的灵敏度为6×103CFU/ml;与枯草芽胞杆菌、苏云金芽胞杆菌、矮小芽胞杆菌、蜡样芽胞杆菌、蕈状芽胞杆菌等相似菌株无交叉反应. 结论：本研究建立的方法对炭疽芽胞杆菌检测具有很好的敏感性、特异性,为生物恐怖因子现场检测提供了新方法,在国境检疫及公共卫生安全领域有较好的应用前景.