高效TALEN/Cas9敲除小鼠平台的建立及对科研的推助

摘要

近年来ZFN、TALEN、Crisp技术的出现使人们突破了只能通过胚胎干细胞(ESC)生产小鼠、大鼠基因敲除模型的限制,利用这些新技术,通过对许多物种的受精卵胚胎进行操作,可以制备各种基因修饰动物模型,极大的推动了实验动物模型的发展.转基因动物中心在2013年5月及7月分别利用TALEN和Crisp技术,通过胚胎注射成功生产出条件性敲除小鼠(8月份cell才有条件性敲除成功报道),阳性率均可达到5-20％.利用两步法即胞核和胞质均注射TALEN及打靶载体，通过提高TALEN的注射起始浓度，成功获得了发生正确同源重组的条件性敲除小鼠。利用Crisp/cas9系统进行两步法注射，打靶载体浓度低至5ng/ul时同样可以高效获得条件性敲除小鼠。高效敲除平台的建立极大的缩短了动物实验周期，为所在细胞坏死、肝炎、免疫、肺发育、毛发干细胞调控、肺癌等方向的在体研究提供了强力支持和推助。