猪繁殖与呼吸综合征病毒Nsp2与宿主CD2AP相互作用的分子机制

摘要

应用免疫共沉淀技术证实了猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)非结构蛋白2(Nsp2)与宿主CD2相关蛋白(CD2AP)的相互作用,利用酵母双杂交技术进一步确定了Nsp2的脯氨酸基序与CD2AP的SH3结构域相互作用.激光共聚焦分析表明,在PRRSV感染的MARC-145细胞和猪肺泡巨噬细胞(PAM)中,Nsp2与CD2AP共定位于细胞核周围,而CD2AP在未感染细胞中均匀分布于细胞质.干扰细胞CD2AP的表达能够抑制PRRSV的增殖.进一步的研究结果证实,Nsp2可以通过上调组织蛋白酶L(CatL)的表达,实现对CD2AP的降解;CD2AP的降解导致正常细胞骨架的破坏和细胞分裂的缺陷,有利于病毒诱导TGF-β1引起的细胞凋亡,并且Nsp2能够激活TGF-pi的Smad3通路.对PRRSV感染猪肺脏免疫组化分析表明,TGF-β1和CatL主要分布于巨噬细胞、气管上皮细胞和肺泡上皮细胞.我们的研究提示了Nsp2与CD2AP的相互作用在PRRSV的细胞致病机制中发挥着重要的作用.