规模化养鸡场禽流感监测与快速诊断研究

摘要

禽流感是由正黏病毒科,流感病毒属A型流感病毒引起的一种急性、高度接触性的禽类烈性传染病.给养禽业造成了严重的经济损失,也给人类的健康带来了巨大威胁,因此迫切需要建立禽流感病毒的监测网络,及时监测养鸡场禽流感的发生情况和病毒变化,在养禽场达到早期快速、准确诊断禽流感的目的,及时控制禽流感的蔓延.rn 在山西30个县区挑选有代表性的、规模化的养鸡场，建立了监测网络，组织监测队伍，运用流行病学调查、实验室检测方法对养鸡场进行全方位的监测。采集病死或扑杀的禽，取喉气管、脑、胸肌心肌和肺组织等，活禽静脉采集血液、采集气管拭子或泄殖腔拭子、雏禽采集新鲜的粪便等，送检疑似样品600余份。根据GenBank中AIV血凝素(HA)基因序列，设计AIV的通用引物，以及H1,H3,H9各亚型的引物。通过禽流感病毒总RNA的提取、反转录合成禽流感cDNA,PCR扩增鉴定禽流感病毒;H9亚型AIV的LAMP引物设计、LAMP反应条件的优化等方法对所采样品进行禽流感病毒检测和遗传性研究。对LAMP反应体系在如下范围内进行优化:MgS04(0.6~9mmol/L)/Betaine(0.2~1.9mmol/L)、BstDNAPoLymerase(4~14U)、dN TP(0.6~1.6mmol/L)。将温度按59℃,60℃,61℃,62℃,63℃,64℃依次递增，多次重复试验后确定最佳退火温度。利用建立的鉴别H9亚型禽流感病毒的LAMP方法对以上600余份疑似样品进行禽流感病毒扩增，和PCR鉴定结果对比，验证了LAMP方法的可靠性。