鸡β-防御素Gal-9 cDNA的克隆、表达及其抑菌活性的研究

摘要

本研究旨在克隆鸡 β-防御素 Gal-9基因,对其预测的成熟肽基因进行原核表达和对产物进行抑菌活性的检测.根据 GenBank 发表的鸡β-防御素基因Gal-9(NM_001001611.2)设计引物,采用RT-PCR方法从鸡食道中扩增得到鸡β-防御素Gal-9基因,将该成熟肽基因克隆到原核表达载体pET-32a(+)载体的EcoRI/XhoI双酶切位点上,构建重组原核表达质粒pET-32a-Gal-9.将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),于37℃ 进行诱导表达.扩增出Gal-9其cDNA大小为204bp,成熟肽编码42个氨基酸.SDS-PAGE电泳表明,重组鸡Gal-9蛋白大小约为25ku,与预期大小一致,重组蛋白主要以包涵体形式存在.重组鸡Gal-9蛋白对金黄色葡萄球菌(ATCC 25923)、粪肠球菌(ATCC 29212)、大肠杆菌(ATCC 25922)、酵母菌(GS115)都能产生抑菌作用,最小抑菌浓度分别为62.50mg/L、31.75mg/L、125.00mg/L、31.75mg/L.成功获得了鸡β-防御素Gal-9成熟肽基因的表达产物,证实了重组鸡Gal-9蛋白具有广谱的抗菌活性,体外抑菌试验为其在家禽生产中应用提供了理论基础.