高价特异半抗原雌二醇抗体及酶标雌二醇复合物的研制

摘要

目的：制备出高价特异的半抗原雌二醇抗体和高纯度稳定的雌二醇-17半琥珀酸一辣根过氧化物酶（HRP）复合物。方法：主要使用材料包括半抗原载体复合物、半抗原活化体、HRP及免疫用新西兰纯系家兔。具体方法为：（1）自行设计小分子半抗原的微量快速免疫方案，免疫全过程半抗原雌二醇的总使用体重量为367．5μg／kg，免疫时间为11周。（2）首次建立活化4B珠与13sA交联的反相快速亲合免疫吸附技术，以除去抗载体抗体，批次特异纯化了抗雌二醇抗体，（3）改进皮质醇-17半琥珀酰胺-HRP的标记法，建立了雌二醇-17半琥珀酸-HRP标记技术。结果：研制出高价特异的抗雌二醇抗体，效价1：5万以上、抗体的活性达5mg／L；抗载体BSA抗体的含量为O。首次制备出高纯度稳定的雌二醇-17半琥珀酸-HRP复合物；用ELlSA法与自制固相E2抗体结合鉴定，复合物经sephadex G75纯化后A<,450>峰值与A<,403>及A<,280>基本吻合，复合物的活性为5mg/L。结论：该研究建立的半抗原雌二醇抗体及酶标雌二醇复合物的制备、纯化及分析鉴定技术简便、快速经济，效果满意。