枯草芽孢杆菌碱性果胶酶基因的克隆与表达

摘要

碱性果胶酶可在碱性条件下水解聚乳糖醛酸α-1,4-糖苷键并释放出可溶性不饱和寡聚乳糖醛酸,在食品工业中具有广泛的应用.本文对枯草芽孢杆菌FJU-212碱性果胶酶基因进行了克隆表达研究.该基因全长1206bp.rn 构建了以AOX1为启动子的毕赤酵母基因工程菌GS115-pPIC9K-PGL，实现PGL的异源表达，酶活为89±5.876 U/mL。为了提高该基因工程菌碱性果胶酶的表达量，对影响表达的各种单因素进行了优化研究。优化后的重组毕赤酵母EIM-60产碱性果胶酶酶活力为425U/mL，较优化前提高了4.8倍。通过硫酸按梯度盐析及HiTrap TM Q(HP)离子柱层析对重组毕赤酵母EIM-60所产碱性果胶酶进行了分离纯化，纯化倍数为4.27,回收率为13.3%，获得了电泳纯的表达产物。为了使碱性果胶酶基因能在毕赤酵母中获得非诱导表达，成功构建了以GAP为启动子的毕赤酵母基因工程菌GS 115-pGAPZαA-PGL，实现PGL的非诱导表达。