破伤风毒素C片段基因克隆、重组表达及免疫原性研究

摘要

应用ＰＣＲ技术从破伤风梭状芽孢杆菌ＤＮＡ中扩增出１．４ｋｂ ＤＮＡ基因， 其克隆到ｐＵＣ１８质粒中，经测序证明该ＤＮＡ片段为破伤风片段Ｃ的基因，并将此基因片段亚克隆到ｐＧＥＸ－４Ｔ－２，构建成表达质粒ｐＧＥＸ－ＴＣ，在Ｅ．ｃｏｌｉ中进行表达。经聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫印迹鉴定，表达产物为７６ＫＤ的特异性重组蛋白。动物实验显示：１μｇ重组蛋白免疫动物，可使动物产生１ＩＵ／ｍｌ的破伤风抗素单位，动物血清的抗体滴度可达１：８００。