一个HBxAg相关肝癌差示表达基因的克隆及功能研究

摘要

HBV尤其是HBxAg和肝癌发病密切相关.实验研究显示,HBx不仅能体外转化鼠的肝细胞株,而且能和p53抑癌基因结合,抑制其功能[1].进一步实验证实,在HBx转基因鼠中,X蛋白和p53形成的复合物与肿瘤的发生有一定关系.此外在对HBx的研究中许多学者均发现一个重要信息,即HBxAg是一个转录激活蛋白.当HBx DNA整合入人基因组DNA后编码出的HBx蛋白具有转录激活特性及转化特性.更有实验证实,HBx因能改变和调节一些转录因子的活性,通过改变信号传导途径,在转录调节水平上介导肿瘤的形成.因此,通过HBx转染HepG2细胞,建立表达HBxAg的细胞模型,研究宿主细胞因HBxAg的转入而在基因水平上的变异,即有哪些基因被HBxAg启动而表达上调,又有哪些基因被HBxAg抑制而表达下降.本文通过应用1996年刚刚建立的、较mRNA差异显示(DD-PCR)及cDNA代表性差异分析(cDNA RDA)更为先进的抑制差减杂交技术(suppression subtractive hybridization,SSH),完成了对经HBx转染的HepG2X和对照细胞HepG2CAT的cDNA文库的差减杂交,观察了两株细胞因HBx的转染而导致的基因表达差异.对有差异的其中1个基因片段,进一步克隆出了全长基因序列并做了初步功能分析.