用竞争结合法检测HLAI类分子抗原递呈能力

摘要

目的:建立弱酸处理后荧光素标记肽竞争结合法分析MHC I类分子抗原递呈能力的方法,并评估其实用性.方法:PH2.7-3.1的柠檬酸缓冲液对B淋巴母细胞进行短时处理后,即用IMDM培养液中和PH,然后加入β2微球蛋白、荧光素标记的9肽及竞争肽共同孵育,FACs检测细胞表面的平均荧光强度,以达到50﹪抑制所需的竞争肽浓度作为衡量竞争肽与MHC分子结合能力的指标.结果:通过不同PH的柠檬酸缓冲液处理、处理后不同时间加β2微球蛋白和/或荧光素标记肽、加入不同稀释度的竞争肽等角度,对方法进行评估,结果显示本方法操作简便、结果可靠、非特异性吸附小.结论:在排除其它MHC I类分子的干扰后,本方法适合在国情条件下广泛开展MHC I类分子抗原递呈能力及T细胞肽表位筛选等研究.