人白细胞介素-10基因的克隆与逆转录病毒载体(MSCV-hIL-10)的构建

摘要

目的：克隆、测序人白细胞介素-10(hlL-10)基因片段,构建逆转录病毒栽体。rn 方法：采用刀豆蛋白A活化的人外周血单个核细胞培养提取总RNA,设计随机引物并逆转录反应合成hlL-10cDNA第一链,并以hIL-10特异性引物行PCR扩增,获得hlL-10克隆基因片段,将hlL-lO克隆基因片段,经双酶切后定向插入到逆转录病毒载体(MSCV)中,用脂质体法特染PT67包装细胞,以G418筛选阳性克隆。rn 结果：PCR扩增出534 bp特异性片段,测序结果表明同源性与GenBank报道完全一致,hIL-10基因片段插入MSCV栽体中经转染包装后得到分泌hlL-10的病毒悬液。rn 结论：成功克隆hIL-10开放阅读框架,成功构建MSCV-hlL-10重组质粒,获得高滴度的分泌hIL-10的病毒悬液,hIL-10的表达可以应用于移植排斥的基因治疗。