抗氨苄青霉素多克隆抗体的制备

摘要

用戊二醛法和物理方法，分别以BSA、HSA、OVA为载体蛋白合成了免疫抗原和包被抗原，并通过紫外扫描法鉴定了合成的抗原为载体蛋白和氨苄青霉素的复合物。rn 将偶联抗原用弗氏佐剂乳化后免疫新西兰大白兔，制备得到了多克隆抗体，并对ELISA检测条件进行了优化。得到酶标二抗的最佳使用浓度为1600倍稀释。Ag5、Ag6、Ag7包被抗原的最佳包被浓度分别为6400、800和400倍稀释，且在ELISA试验中，选择与免疫抗原合成方法不同的合成抗原作为包被抗原为佳。底物的最佳配方为10ml底物缓冲液+7μlH2O2+200μL TMB。酶标板选用Corning酶标板。在以上条件下测得6只兔子抗血清的效价在1×103～128 × 103之间。亲和性试验表明以物理方法直接合成的免疫抗原比戊二醛法合成的免疫抗原亲和性好。交叉反应实验证实，抗血清与阿莫西林有极高的交叉反应率为78％，而与其他结构相似的五种抗生素的交叉反应都很小。本检测方法的检测极限是4.17ng/ml。