狂犬病病毒糖蛋白重组犬2型腺病毒的构建

摘要

本试验以犬2型腺病毒全基因组重组质粒pPolyⅡ-CAV-2及其E3区重组质粒pVAX-E3为基础,通过Dra Ⅲ和Ssp Ⅰ双酶切,缺失25097bp-26141bp共1044bpE3区片段,按与编码链相同转录方向插入由CMV启动子、狂犬病病毒SRV9株糖蛋白基因、SV40 polyA构成的总长2424bp的表达盒,获得重组基因组质粒pPoly Ⅱ-CAV-2-CGS(34.7kb).以Asc Ⅰ和Cla Ⅰ双酶切,游离重组基因组(32.7kb),在脂质体Li0pofectamine 2000介导下,转染MDCK细胞系,获得了E3区携带狂犬病病毒糖蛋白表达盒的重组犬2型腺病毒CAV-2-CGS.Western印迹试验表明,CAV-2-CGS表达了狂犬病病毒糖蛋白.初步接种试验显示,重组病毒可以诱导犬产生狂犬病病毒特异性抗体.