影响异种克隆牦牛囊胚发育的研究

摘要

异种克隆是保护濒临灭绝物种一种行之有效的方法,但该方法始终受到效率低下的困扰.本研究体外培养了不同个体的牦牛耳成纤维细胞、颗粒细胞和输卵管细胞,分别作为供核细胞移入去核牛卵母细胞中,均可完成体外牦牛的早期囊胚发育(囊胚率高达35﹪).通过对不同年龄阶段、不同个体、不同细胞类型、细胞的饥饿与否、细胞冷冻与否,以及卵母细胞成熟率,不同融合到激活时间对克隆效率的比较发现:卵母细胞的质量是核移植成功的基础,当成熟率在40﹪以下时,将显著影响异种克隆牦牛的囊胚发育(由25﹪降到3﹪,P<0.01);发现影响异种克隆牦牛早期囊胚发育的重要因素为延迟激活时间,当延迟激活1.5小时可显著提高异种克隆囊胚率(由21﹪提高到35﹪,P<0.05);而不同类型细胞、不同个体、不同年龄、饥饿与否、冷冻与否对异种克隆牦牛早期囊胚发育影响不显著,这为简化供体细胞的处理提供了依据.异种克隆囊胚核基因组和线粒体遗传物质鉴定结果表明:囊胚核基因组来自牦牛供核细胞,囊胚线粒体以牛卵线粒体为主,牦牛供体细胞线粒体含量甚微.