抑制消减杂交结合cDNA微阵列芯片技术筛选猪蛔虫性别特异表达基因的研究

摘要

本研究采用抑制消减杂交技术(Suppressionsubtractivehybridization,SSH),分别构建了猪蛔虫雌、雄成虫性别特异消减cDNA文库,并采用地高辛(DIG)标记的cDNA探针进行SouthernBlot.检验所构建文库的特异性.从雌、雄虫文库分别挑取1044和1119个克隆,PCR扩增其插入片断,经纯化后点样于预先处理好的基片上,制备成cDNA微阵列芯片.将分别标记上荧光素Cy3-dUTP和Cy5-dUTP的猪蛔虫雌虫和雄虫cDNA,与制备好的cDNA芯片杂交,用芯片扫描仪扫描,获取每个点的杂交信号,为避免系统误差,将雌雄虫用Cy5和Cy3进行一次反标,再与平行的cDNA芯片杂交.用图像分析软件(QuantArray)计算出每个点杂交后不同荧光标记的信号值,筛选出正反标中都同时具有表达差异的基因克隆共1559个,其中雌虫702个,雄虫857个.将表达差异最明显的前500个克隆进行测序,获得380个有效序列,经生物信息学分析并和EST数据库已有序列对比,发现有18个是新的ESTs.新ESTs的获得将为下一步性别基因功能研究和通过生殖调控来达到控制线虫病的目的奠定了基础.