猪圆环病毒Ⅱ型Cap蛋白重组腺病毒的构建、鉴定与免疫原性的研究

摘要

猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)是近年来新发现的引起仔猪多系统衰弱综合征(PMWS)的必需病原,含有两个主要的阅读框ORF1和ORF2,分别编码复制相关蛋白(Rep蛋白)和核衣壳蛋白(Cap蛋白),其中Cap蛋白含有病毒主要抗原表位,是研究PCV2基因工程苗的主要候选目的基因.本研究利用PCR技术将Cap蛋白基因克隆入人5型腺病毒穿梭载体(pShuttle-CMV),并与腺病毒骨架载体(pAdEasyTM)共转化大肠杆菌BJ5183进行同源重组并转染HEK-293A细胞,经三次空斑试验纯化获得了重组腺病毒rAd-Cap,测定其TCID60为1013.7/ml.用RT-PCR、间接ELISA、Westernblot和IPMA等试验证明了Cap蛋白在腺病毒中获得稳定表达.将该重组病毒免疫普通小白鼠,用间接ELISA和Western-blot测定其抗体,抗体滴度最高可达1:12800;用MTT法测定其淋巴细胞增殖,证明该病毒在二免后20d左右能刺激鼠的淋巴细胞增殖.从而为发展PCV2的重组腺病毒基因工程疫苗奠定了基础.