抗人NRP-1单克隆抗体对结肠癌LOVO细胞株的促凋亡作用

摘要

目的:研究抗人神经菌毛素1(neuropilin1,NRP-1)单克隆抗体对结肠癌LOVO细胞的促凋亡作用.rn 方法:小鼠腹水法生产抗NRP-1单克隆抗体(NRP-1 MAb)并用rProtein A亲和柱纯化抗体;间接ELISA检测抗体的滴度水平; 细胞免疫荧光检测NRP-1蛋白在结肠癌细胞株LOVO上的表达;MTT法检测NRP-1 MAb对LOVO的生长抑制作用;DAPI荧光显微镜法观察细胞凋亡形态;ANNEXIN V-FITC/PI流式细胞仪法检测NRP-1 MAb诱导LOVO细胞凋亡;DNA Ladder方法检测NRP-1 MAB诱导LOVO的凋亡作用; Westernblotting检测凋亡蛋白Caspase-3蛋白的表达.rn 结果:SDS-PAGE和间接ELISA检测纯化的NRP-1 MAb具有较高纯度和效价;细胞免疫荧光染色显示NRP-1定位于LOVO细胞膜上; MTT法检测和ANNEXIN V-FITC/PI流式细胞仪法检测结果显示,NRP-1 MAb对LOVO细胞有生长抑制作用和促凋亡作用;DAPI染色,荧光显微镜观察发现,NRP-1 MAb可以诱导LOVO细胞核浓缩与碎裂;DNA Ladder表明在NRP-1 MAb的作用下,LOVO细胞DNA提取物呈现很亮的彗星梯状拖尾,说明发生凋亡;Western blotting检测到在NRP-1 MAb作用下,LOVO细胞的Caspase-3蛋白表达量增加.rn 结论:纯化的NRP1 MAb能抑制LOVO细胞的生长并诱导其凋亡.