奶牛粪便沼气发酵前后发酵液中产甲烷菌多样性分析

摘要

采用产甲烷菌16SrDNA特异性引物和PCR扩增的方法,构建了以牛粪为发酵基质模拟产沼气前后的发酵液16SrDNA文库,并通过RFLP酶切分析和序列分析.结果表明沼气发酵前后存在着产甲烷菌的演替过程,在发酵前后各自存在着占优势地位的种群.发酵前的发酵基质中,109个克隆子被划分为29个不同的RFLP型,其中,最大的六大RFLP型分别含有22、14、12、11、7、7个转化子,而其余的23个RFLP类型中分别含有1～4个转化子,测序后表明这六种RFLP型的克隆子分别与甲烷粒球菌(Methanocorpusculumlabreanum,AF095267)、瘤胃甲烷短杆菌(Methanobre-vibacterruminantium,AY196666)以及甲烷短杆菌属(Methanobrevibacter)的产甲烷菌高度同源;而发酵盛产期发酵液中所挑取的109个转化子被分为14种酶切类型,其中占优势地位的四大RFLP型分别含有28、23、23、15个转化子,经测序后均与小甲烷粒菌(Methanocorpusculumbavaricum,AY260435.1)具有高度同源性.实验表明:随着沼气发酵的进行,沼液中的产甲烷菌的群落结构发生了很大的变化,存在着明显的演替过程.