柑桔SSR标记体系的建立

摘要

为探索适宜柑桔的SSR扩增反应体系,以清见桔橙和强德勒柚为试材,研究了柑桔SSR技术中PCR反应体系中的主要成分对SSR扩增结果的影响.对SSR反应体系中的Mg2+浓度、引物浓度、dNTP浓度、TaqDNA聚合酶浓度和模板浓度进行了探索,确立了适合柑桔的SSR反应体系为:在20 μl反应体系中,Mg2+、引物和dNTP的最适浓度分别为1.8 mmol/L、1.0 μmol/L、0.20 mmol/L;反应体系中TaqDNA聚合酶宜加入0.8 U,模板DNA应加入40～60 ng.并利用该反应体系对清见桔橙等4个柑桔品种进行SSR反应,用10％的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测,不同品种间DNA谱带多态性丰富,证明该体系稳定可靠.