猪白细胞介素-18基因的表达及重组蛋白的纯化

摘要

以pcDNA3.1-IL18为模板,PCR扩增获得猪白细胞介素18(IL-18)的成熟肽基因,Kpn Ⅰ、Sac Ⅰ双酶切PCR产物作为供体,KpnⅠ、SacⅠ双酶切的pET41c和pET32c作为载体,连接载体供体,转化DH5α,重组质粒经双酶切、PCR鉴定及测序,筛选出阳性重组质粒,并命名为pET41c-IL18和pET32c-IL18.将pET41c-IL18和pET32c-IL18转化大肠埃希氏菌BL21(DE3),用1 mmol/LIPTG37℃过夜诱导表达,SDS-PAGE及Western-blotting分析结果表明,所表达的重组蛋白主要以包涵体形式存在,pET32c-IL18重组蛋白分子质量约33 Ku,与预期大小相符.将包涵体提取物用8 mol/L脲变性,经Ni-NTA柱纯化,透析复性,得到纯化的IL18蛋白.