HPLC/UPLC-分光光度法有效扩展重建人体组织模型检测易着色物质刺激性/腐蚀性的能力

摘要

重建人体组织是皮肤和眼刺激性/腐蚀性替代试验中常用模型之一，唆哇蓝(MTT)比色法是这些试验中常用的检测组织活力方法。MTT比色法的原理为活细胞线粒体中的玻拍酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲履(Formazan)并沉积在细胞中，死细胞则无此功能。使用溶剂溶解Formazan，用比色法在540或720nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。此方法运用在重建人体模型时，某些易在组织表面着色的物质会和Formazan-同溶解在溶剂中，干扰吸光值。通过实验分析，实验结果肯定了HPLC/UPLC-分光光度法的有效性，且可以避免着色物质的干扰，扩展了Episkin皮肤模型对化妆品原料测试的能力。HPLC/UPLC-分光光度法作为MTT比色法有效的补充已经在多个实验中得到验证，并且获得了DECD的认可，有条件的国内实验室可逐步开展验证工作，扩展运用重建人体组织模型检测刺激性和腐蚀性的试验的检测能力，促进体外替代试验的发展。