温阳通脉对糖尿病血管内皮损伤保护作用的研究

摘要

目的:在制备温阳通脉颗粒的基础上,研究温阳通脉对糖尿病内皮保护作用,通过体内,体外药效学研究,明确温阳通脉颗粒的药理作用特点和规律,阐明药效作用的分子机理和路径,从而阐明温阳通脉方法防治糖尿病血管损伤的可行性.rn 方法:在查阅文献的基础上，根据处方药物的理化性质及药理作用，通过正交试验确立工艺参数，工艺再现和中试研究建立提取制备工艺，确定温阳通脉颗粒的生产工艺。大鼠空白组给予基础饲料，其余大鼠给予高糖高脂饲料，一个月后按照体重腹腔注射链尿佐菌素STZ (50m/kg)溶液，空白组继续给予普通饲料，实验组给予高糖高脂饲料，72h后大鼠禁食8h断尾测定大鼠空腹血糖，大于ll.lmmol/L者为成模。将成模大鼠随机分组，模型对照组，温阳通脉颗粒高、中、低剂量组，血塞通对照组，轻苯磺酸钙对照组，空白组作为正常对照组，每天给药1次，连续给药30天，颈外静脉采血，测定糖尿病大鼠血浆内皮素(ET),血清一氧化氮(NO)、血糖、血脂、糖基化血红蛋白;取血后处死大鼠，分离主动脉，进行免疫组化检查，观察对糖尿病主要组织中血管内皮生长因子(VEGF)的影响。稳定期采血，制备含药血清。采用体外培养人脐静脉血管内皮细胞，分别加入高糖诱导炎性损伤，过氧化氢诱导氧化损伤，加入不同剂量的含药血清，通过MTT比色法观察细胞活力，检测细胞中LDH，SOD的含量，并采用RT-PCR方法检测VECMCP-1，ICAM-1mRNA的表达，明确含药血清对血管内皮的保护作用和分子路径。rn 结果:药效学部分(在体研究):各给药组大鼠血糖值与模型组比较明显降低，糖化血红蛋白值表达出同样的统计学差异。给药组甘油三醋、总胆固醇、高密度脂蛋白和低密度脂蛋白与模型组比较，均存在明显差异，各给药组不同程度改善模型大鼠脂代谢状况。模型组血清一氧化氮水平明显降低，内皮素水平明显升高，各给药组不同程度改善上述两个指标，免疫组化检测模型组血管内皮生长因子VEGF表达明显升高，阳性目标总个数明显高于空白组，其他各组均明显降低血管内皮VEGF的表达。药效学部分(体外研究):30mmol/L高糖建立HUVEC高糖损伤模型，300μmo1/LH2O2建立HUVEC H202损伤模型，高低剂量含药血清均可提高模型组细胞活力，培养液中SOD含量，给药组比两种模型组含量均升高;上清中LDH含量，含药血清组比两种模型组含量均降低;加含药血清组内皮粘附因子ICAM-1和MCP-1含量较两种模型组低。rn 结论:综合结果可见，温阳通脉颗粒对糖尿病内皮细胞具有明显的保护作用。明确了温阳通脉颗粒的药理作用特点和规律，阐明了药效作用的分子机理和路径，从而阐明温阳通脉方法的可行性。