肝宝胶囊防治总胆管结扎肝纤维化大鼠的作用机理研究

摘要

目的:评价肝宝胶囊防治肝纤维化作用,初步探讨其可能的作用机制,为其临床应用提供药理学依据.rn 方法:运用总胆管结扎(BDL)致大鼠肝纤维化模型评价肝宝胶囊对肝纤维化的防治作用。rn 结果:BDL模型组大鼠体重在术后一直增长缓慢.大鼠在胆管结扎4周后,肉眼观察发现BDL模型组大鼠的肝、脾肿大,部分肝组织有坏死和硬化的现象,颜色偏黄.发现BDL模型组大鼠的肝、脾肿大，部分肝组织有坏死和硬化的现象，颜色偏黄。其肝、脾指数升高，肝脏经脯氨酸含量显著增加，显微镜下可见其肝脏出现中至重度的纤维化、a-SMA阳性表达显著增加、胶原积分光密度值、阳性面积、平均光密度以及阳性目标个数均显著增加，其血清ALT,AST,ALP,γ-GT活性显著增加，TBIL, DBIL含量增加明显，ALB及A/G水平显著降低;其肝脏组织的IL-18，MIP-1a.TGF-β1蛋白表达显著升高，但IL-la,IL-4,IL-10及TNF-a蛋白表达显著降低;其肝组织中SMAD4,P-NFκB, P-P38MAPK,P-Akt以及P-STAT5表达均显著降低，而P-p70S6K的表达明显升高，与对照组比较差异具有统计学意义。在BDL术后5天开始给药，每天给药I次，连续4周，结果显示:肝宝胶囊4.0原生药g·kg-1，可使BDL大鼠大鼠体重增加;显著降低其肝脏组织的HyP含量，纤维化评分，a-SMA表达，胶原积分光密度值、阳性面积、平均光密度以及阳性目标个数，显著降低其血清ALT,AST,γ-GT以及ALP活性，TBIL及DBIL含量;升高其血清ALB及A/G比值;可显著升高BDL大鼠肝脏组织IL-la,IL-4,IL-10,TNF-a及IL-13蛋白表达，降低其IL-18,MIP-la,MIP-2以及TGF-β1蛋白表达，能使P-P38 MAPK和P-STAT5的表达升高，与模型组比较差异均具有统计学意义。肝宝胶囊2.0原生药g·kg-1，可使BDL大鼠体重增加，显著降低其肝脏指数、肝脏组织的HyP含量、肝脏纤维化评分、a-SMA,肝脏胶原积分光密度值、阳性面积、平均光密度以及阳性目标个数;显著降低BDL大鼠血清ALT,AST,y-GT以及ALP活性，降低血清TBIL及DBIL含量;升高血清ALB及A/G比值，显著升高其肝脏组织IL-la,IL-4,IL-10,TNF-a及IL-13蛋白表达，降低其IL-18,MIP-la,MIP-2以及TGF-β1蛋白表达，升高其P-NFxB,P-P3gMAPK,P-Akt及P-STAT5,显著降低P-p70S6K的表达，与模型组比较差异具有统计学意义。肝宝胶囊1.0原生药g·kg-1可显著降低BDL大鼠的肝脏指数、a-SMA表达、胶原平均光密度以及阳性目标个数，显著降低其血清ALT,AST,y-GT以及ALP活性，ALB及A/G比值，降低其血清TBIL及DBIL含量;显著升高其肝脏组织IL-la,IL-4,IL-10,TNF-a及IL-13蛋白表达，降低其IL-18,MIP-Ia,MIP-2以及TGF-β1蛋白表达，与模型组比较差异具有统计学意义。rn 结论:提示，肝宝胶囊可能是通过提高炎症细胞因子水平及其相关信号通路的活性，使纤维化组织保持一定的炎症活性，增加细胞外基质的降解;同时，还通过抑制IL-18以及TGF-β1蛋白表达，减少HSC活化，减少胶原等细胞外基质的形成;至于Akt活性升高而p70S6K活性降低，进一步说明这种作用可能与肝宝胶囊抑制TGF-β1表达有关，也可能与肝宝能够调节Akt-mTOR-p70S6K通路中mTOR活性有关。