KLF4泛素化修饰机制的研究

摘要

目的:研究参与调控KLF4泛素化降解途径的泛素连接酶,以及KLF4泛素化降解途径在乳腺癌发生发展中的作用.rn 方法：利用E3连接酶相关基因siRNA 文库筛选可能参与KLF4泛素化的E3连接酶.在乳腺癌细胞系MCF7中,分别瞬时转染216个E3连接酶相关基因的成熟体siRNA后并通过western-blotting方法检测KLF4蛋白水平,来筛选可能参与KLF4的泛素化降解的E3连接酶.进一步利用半衰期追踪实验验证相关的泛素连接酶对KLF4稳定性的影响，利用泛素化实验验证其对KLF4泛素化的影响。利用免疫共沉淀实验研究泛素连接酶与KLF4的相互作用。建立稳定敲降E3连接酶的乳腺癌细胞系来研究敲降E3连接酶对乳腺癌细胞增殖、凋亡和侵袭转移等表型的影响。rn 结果:通过泛素结合相关基因siRNA文库筛选以及后期验证实验发现F-box家族成员FBX09能够明显降低KLF4蛋白的稳定性，提高KLF4的泛素化水平。免疫共沉淀试验发现FBX09能与KLF4蛋白相互结合。FBX09可以通过促进KLF4泛素化降解提高乳腺癌细胞的迁移。rn 结论:FBX09参与KLF4蛋白的泛素化调节，影响乳腺癌细胞的迁移能力，进一步研究KLF4泛素化降解的机制以及泛素化调控KLF4在肿瘤发生发展及侵袭转移中的作用，将为阐明KLF4的调控机制及生物学功能奠定基础。