放射后的间质成纤维细胞通过肿瘤间质相互作用促进食管癌细胞的侵袭

摘要

目的：放疗是现今食管鳞癌患者可选择的一项重要的治疗方法,但是最近有研究指出放射线可以促进肿瘤细胞的侵袭与转移.肿瘤间质相互作用可能在肿瘤的恶性进展中起着重要的作用.本实验旨在研究放射线对间质成纤维细胞的影响以及与食管癌细胞侵袭性相关的肿瘤间质成纤维细胞相互作用.肝癌衍生生长因子过去被证明与食管癌的放疗敏感性相关.本实验亦要探索肝癌衍生生长因了在放射线对肿瘤间质相互作用引起的食管鳞癌细胞侵袭性增强过程中所起到的作用。rn 方法：在本研究中，CCK8实验用来评价经X射线照射后的原代成纤维细胞的生长抑制率。当生长抑制率大于200/时，选择此时的放射剂量为最大照射剂量。因此在我们的研究中，从食管鳞癌患者组织中提取出来的原代成纤维细胞用X射线照射剂量分别为。2、4、6、8和lOGy。免疫印迹分析不同放射剂量照射后的成纤维细胞中蛋白表达变化。同时，通过侵袭实验研究食管鳞癌细胞和照射后成纤维细胞共培养后食管鳞癌细胞的侵袭能力变化和散射实验研究照射后成纤维细胞的条件培养基引起的食管鳞癌细胞散射活性。散射实验可用来研究上皮间质转化以及检测因了对细胞迁移能力的影响。随后，再次应用免疫印迹分析经过未照射成纤维细胞和照射后成纤维细胞条件培养液刺激后的食管鳞癌细胞蛋白表达变化。rn 结果：免疫印迹分析显示随着放射剂量的升高，经过放射线照射后24小时以及48小时的成纤维细胞中肝癌衍生生长因了和波形蛋白表达随之逐渐升高以及E钙勃蛋白表达随之降低。利用体外侵袭实验我们发现食管鳞癌细胞和未照射成纤维细胞共培养可以促进肿瘤细胞的侵袭，于此同时，发现食管鳞癌细胞与照射后成纤维细胞共培养，随着照射剂量的升高，肿瘤细胞的侵袭性越强。利用散射实验发现照射后的成纤维细胞产生的条件培养基可以促进食管鳞癌细胞的散射活性。最后，免疫印迹实验分析显示:随着照射剂量的升高，经过照射后成纤维细胞的条件培养基刺激的食管鳞癌细胞中R-链蛋白，肝癌衍生生长因了以及波形蛋白表达逐渐升高，E钙x蛋白表达逐渐降低。rn 结论：这些实验数据显示:照射后成纤维细胞可能通过提高肝癌衍生生长因了和p-链蛋白的表达以及促进上皮间质转化提高食管鳞癌细胞的侵袭能力。越来越多关于成纤维细胞以及其对放射线的反应的研究结果可以促进新的治疗策略的产生，从而提高放疗的抗肿瘤效果。