PSA基因转染树突状细胞治疗前列腺癌癌的实验研究

摘要

目的:探讨以前列腺癌特异抗原(PSA)基因转导树突状细胞(DC)治疗前列腺癌的可行性。rn 方法:取健康人外周血，采用密度梯度离心的方法分离外周血单个核细胞(DC前体细胞)，以AIM-V培养基于6孔板培养，贴壁5h，轻轻洗去悬浮细胞(T细胞，冻存备用)，取贴壁细胞，将细胞分为基因转染组及对照组，基因转染组感染携带PSA基因的重组腺相关病毒rAAV/PSA，对照组加入293细胞冻融液，两组细胞均采用重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、自细胞介索4(IL-4)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导DC前体细胞成熟。第7天，收集悬浮细胞(DC)，显微镜观察细胞形态，流式细胞仪分析DC的表面标志CD80、CD86、CD83、CD40、CD1a、HLA-DR、CD14的表达情况；另取该DC与原先冻存的T细胞按1：20比例混合，含5％人血清蛋白的AIM-V为培养基，同时加入IL-2与GM-CSF，共育7天，诱导获得细胞毒性T淋巴细(CTL)，取PSA阳性的前列腺癌细胞株LNcap-FGC为靶细胞，采用51Sr释放法测量杀伤效率，同时以流式细胞仪检测CTL群体中CD8/CD4和CD8/CD56的比值情况，同时分析其CD69、CD25的表达情况。rn 结果: PSA基因转染组的DC表面标志CD80、CD86、CD83、CD40、CD1a,HLA-DR的表达均明显高于对照组DC，所诱导获得的CTL细胞对PSA阳性的前列腺癌细胞株LNcap-FGC有很好的杀伤效果，此杀伤具有特异性和MHC限制性，且该CTL中CD8/CD4和CD8/CD56的比值均明显高于对照组(裂解物冲击DC所诱导的CTL)。rn 结论: PSA基因转染成功制备DC，并诱导特异的CTL，为以DC为基础，基因转染治疗前列腺癌奠定实验室基础。