食管癌中血管内皮生长因子的表达及其对预后的影响

摘要

目的检测食管癌细胞株、食管癌组织中VEGF蛋白的表达水平,探讨VEGF蛋白表达与食管癌生物学特性之间的相互关系,为食管癌综合治疗方案的选择和制定提供理论依据,同时提供准确判断食管癌预后的参考指标. 方法(1)利用免疫组织化学技术、RT-PCR方法和westernblotting方法分别检测三株食管癌细胞系TE-1、TE-13和ECA109中VEGFmRNA的表达.首先应用RT-PCR技术进行三种食管癌细胞株的总RNA提取,经总RNA完整性与纯度的鉴定,最后测量RNA总纯度.(2)Westernblotting方法检测三株食管癌细胞的蛋白提取后,进行蛋白浓度测定,电泳样品的制备,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,考马斯亮蓝染色,电转印,封闭,杂交,一抗、二抗孵育,最后用DAB显色.同时应用westernblotting方法检测36例食管癌患者肿瘤组织中VEGF蛋白的表达并结合临床资料,分析VEGF蛋白表达对食管癌放射治疗疗效的影响.资料间对比分析采用t检验、方差分析、相关性检验,生存分析采用Kaplan-Meier方法,并进行Log-rank显著性检验,多因素分析采用Cox比例风险回归模型. 结果三株食管癌细胞系TE-1、TE-13和ECA109中均有VEGF蛋白表达.经凝胶成像仪进行VEGF蛋白定量后发现,36例食管癌组织中VEGF蛋白高表达者24例,低表达者12例,高表达率66.7﹪;同时检测12例癌旁不典型增生组织,其VEGF蛋白高表达率仅16.7﹪,统计分析发现癌组织与癌旁不典型增生组织中的VEGF表达量有明显差异(P＜0.05),并且VEGF蛋白表达与食管癌CT扫描显示的外侵深度、淋巴结转移有明显相关性(P＜0.05).进一步分析显示VEGF蛋白表达量与食管癌放疗疗效也密切相关(P＜0.05).36例食管癌患者均随访至2005年3月1日,中位随访期9个月(范围3～15个月),随访率100﹪.放疗后近期疗效CR23例、PR13例,总有效率(CR+RP)为100﹪,1年生存率64.15﹪. 结论TE-1、TE-13和ECA109三株食管癌细胞系中VEGFmRNA和蛋白均有表达并且食管癌组织中VEGF蛋白表达较强,与不典型增生组织中的VEGF蛋白表达存在显著性差异.高表达的VEGF蛋白与食管癌组织的局部浸润、淋巴结转移和放射治疗的预后密切相关.